孫建濤 薛素強 潘金金 張青林
（廣州市華南農大生物藥品有限公司 技術服務部）
伴隨家禽養殖規模不斷擴大、集約化程度越來越高帶來的結果就是家禽活動空間的相對減少以及環境性致病菌危害越來越大。當前環境中的條件性致病菌的危害已經成為家禽養殖業不可忽視的重要一部分。而沙門氏菌作為一種常見致病菌, 其既可通過垂直傳播感染也可通過污染的飼料、器具、飲水等進行水平傳播，其帶來的危害越來越嚴重。筆者在臨床中遇到1例由沙門氏菌引發的黃羽肉雞60天齡感染發病的病例, 現報道如下：
2015年3月16日，廣東江門地區一養殖戶在林中飼養的20000 只三黃雞發生以精神沉郁、食欲減退、腹瀉、消瘦和零星死亡為主要癥狀的疾病，至3月20日已死亡200只。該群肉雞1-3日齡，投喂開口藥鹽酸環丙沙星飲水；5日齡免疫新支二聯弱毒苗和新支流滅活油乳苗；10日齡法氏囊飲水；12日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗；25日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗和新流二聯滅活油乳苗；60日齡免疫H5（Re-6+Re-7）滅活油乳苗。雞群開始發病時采用硫酸新霉素+強力霉素進行治療，無明顯效果；截止就診時，雞群病程約4d，死亡200余只。養殖戶使用常用的多種抗生素效果微乎其微，病情無法控制，遂進行診治。
1.臨床表現：病雞發病日齡60d，病雞精神沉郁，采食量減退，消瘦，胸骨彎曲，行動遲緩，癱瘓，雙翅下垂，縮頭閉目，羽毛松亂，嚴重腹瀉，起初排黃白色糊狀糞便，繼而排水樣稀糞，肛門周圍被糞便污染，呈綠色糊狀污穢，后期多因因衰竭而死亡。
2.剖檢變化：剖檢病死雞30 只，病雞心冠有出血斑點、表面有大量白色結節，肝臟腫大、褪色，質脆易碎，偶見菜花樣大壞死灶區，少數病例肝臟破裂，腹腔積有血塊，脾臟腫大、有壞死結節呈斑駁狀，肌胃表面有白色結節，腎臟淤血，腸道黏膜出血，有的腸黏膜脫落。
3.實驗室診斷
3.1 細菌分離培養：無菌采集病雞肝臟，用接種環劃線于SS瓊脂培養基表面，置37oC溫箱培養24h，培養基表面長出無色半透明，中心黑色或幾乎全部黑色的菌苔，該生長特性與沙門氏菌的培養特性基本一致。然后再挑取單個菌落作進一步純化培養，取純化培養菌進行革蘭氏染色, 挑取少許菌落在玻片上用生理鹽水稀釋，將涂片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液染1min，水洗；滴加革蘭氏碘液作用1min，水洗；滴加脫色酒精，約30秒，水洗；滴加沙黃復染液，復染1min，水洗，干后鏡檢。革蘭氏陽性菌呈紫色；革蘭氏陰性菌呈紅色
3.2 生化特性試驗：用無菌接種環鉤取純化后的單個菌接種到微量發酵管內, 倒置管放37 ℃溫箱, 觀察2天。
3.3 藥敏試驗 選擇14 種臨床常見抗菌藥物藥敏片, 在LB瓊脂平板上采用藥敏紙片擴散法操作,37 ℃培養24h 觀察結果。判定標準為：藥物抑菌圈直徑>20 mm 為高敏，15 ～ 20 mm 為中敏，10 ～15 mm 為低敏，<10 mm 為不敏感。
3.4 病毒的分離鑒定 取發病雞的肝臟、脾臟、胰腺進行研磨, 加PBS稀釋后制成懸液，反復凍融三次；7000轉/分，離心15min；加入1萬單位過濾好的抗生素；加入抗生素后置4℃作用1.5小時；7000轉/分，離心15min；每胚0.2ml，接種10-11天齡SPF雞胚。收獲胚液進行HA檢測，對HA陽性樣品進行特異性檢測；HA陰性者，將胚液繼續接種雞胚盲傳，至少盲傳至F3代。接種后雞胚繼續放在溫箱中孵育,每隔24 h 觀察雞胚情況。
4.結果
4.1 病毒分離 HA陰性，也未出現死胚及其他異常現象,所接種雞胚144小時后仍全部存活, 這樣就排除該雞群發病由病毒引起的可能性。
4.2 細菌分離 在SS瓊脂平板上分離所得菌落較純, 細菌菌落光滑、細小，在自然光下呈藍灰色或灰白色閃光，整齊均一。革蘭氏染色鏡檢呈陰性細長桿菌，沒有芽孢，有聚集，偶見兩個或多個連在一起。
4.3 藥敏試驗
表1 藥敏試驗結果
藥物 不敏 低敏 中敏 高敏 抑菌圈直徑
慶大霉素 √ 20
頭孢呋辛 √ 27
四環素 √ 10
頭孢曲松 √ 12
多粘菌素B √ 17
卡那霉素 √ 19
諾氟沙星 √ 15
左氟沙星 √ 10
頭孢噻肟 √ 22
青霉素G √ 0
氯霉素 √ 0
阿米卡星 √ 10
復方新諾明 √ 0
5．治療
從藥敏實驗結果來看，該菌對頭孢類高度敏感，對氨基糖苷類藥物和多粘菌素B中度敏感，對頭孢曲松、四環素、諾氟沙星、阿米卡星、左氟沙星、復方新諾明、氯霉素、青霉素G、復方新諾明等不敏感或耐藥。因此建議該養殖戶馬上采取如下措施：全群飲水中添加硫酸安普霉素可溶性粉，同時添加葡萄糖和口服補液鹽，連續飲用4d，并緊急注射頭孢噻呋鈉；用藥后第3天，雞群采食量明顯上升，死亡逐漸減少，精神逐漸恢復正常，病情得到控制。
6.體會
6.1 肉雞沙門氏菌病的發生，多與養殖環境差相關，南方黃羽雞飼養多數都在林間飼養，受場地衛生條件和氣候變化影響比較大，還與飼料、飲水不潔有關，因此要預防本病，必須加強雞場的飼養管理和環境衛生，保持飼料和飲水的清潔衛生。沙門氏菌要做好如下防控：1.種源凈化：沙門氏菌是垂直傳播性疾病，做好種禽的防疫工作尤為重要！種禽的健康直接關乎肉雞的健康，因此要做好源頭的防控工作。2.流通環節：禽苗在運輸過程中也要注意器具、車輛的消毒衛生，嚴防細菌滋生蔓延！3.養殖環節：1d齡開口藥的預防工作也要做好，選用合適的抗生素進行預防，譬如頭孢類抗生素等的飲水、注射等；環境場地的衛生消毒工作；定期的預防性用藥，掌握好疾病發生規律，定期選擇性投藥。
6.2 合理的用藥：當前沙門氏菌病的治療由于其在臨床上用藥的不合理性造成菌株耐藥性的不斷增加，現有的廣譜抗生素和抗革蘭氏陰性菌的抗生素的效果越來越差。本病例在發病過程中，曾使用左氟沙星、阿米卡星、強力霉素和氟苯尼考等多種臨床常用藥物，但治療效果均不理想。因此選擇藥物要合理，要選擇療效確切、毒副作用少、使用途徑方便及價格低廉并且配伍禁忌少的藥物，同時要注意聯合用藥，選擇協同作用強的藥物組合。要密切用藥后群體的反應情況，做好記錄等。
7.參考文獻
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